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不同產地加工法對宣木瓜藥材中齊墩果酸和熊果酸含量的影響

發布時間 2018年08月24日 07:33    編輯:fashion    來源:中國中醫藥信息

...C法同時測定野木瓜中齊墩果酸與熊果酸的研究.pdf

王曉閣+龍全江+周宙+趙悅+周田田

摘要:目的 考察產地不同加工法對宣木瓜藥材中齊墩果酸、熊果酸含量的影響。方法 采用高效液相色譜法,Agilent HC-C18(2)色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(89∶11∶0.1∶0.05),檢測波長210 nm,柱溫25 ℃,流速1.0 mL/min,測定產地不同加工法樣品中齊墩果酸、熊果酸的含量。結果 4種不同加工法制備的樣品中齊墩果酸和熊果酸的總含量分別為0.86%、0.93%、1.29%、1.47%,表明產地不同加工法對宣木瓜藥材中齊墩果酸、熊果酸的含量有顯著影響。結論 本研究為宣木瓜藥材的產地加工提供了試驗依據。

關鍵詞:宣木瓜;產地加工;高效液相色譜法;齊墩果酸;熊果酸

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.023

中圖分類號:R284.1 文獻標識碼:A 文章編號:1005-5304(2014)11-0075-04

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa (Sweet) Nakai的干燥成熟果實,主產于安徽、山東、浙江、湖北、云南、貴州、四川等地,其中產于安徽宣城的道地藥材稱為宣木瓜。明代李時珍《本草綱目》中有“木瓜處處有之,而宣城者為佳”的記載。木瓜味酸、性溫,歸肝、脾經,有舒筋活絡、和胃化濕之功效,用于治療濕痹拘攣、腰膝關節酸重疼痛、暑濕吐瀉、轉筋攣痛、腳氣水腫[1]。

2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)指出,木瓜的采收、加工方法為:夏、秋二季果實綠黃時采收,置沸水中燙至外皮灰白色,對半縱剖,曬干。根據全國主產區市場調查,木瓜藥材實際生產中多未經燙制處理,而是直接對半縱剖、曬干,其成品外觀差異不大。目前,木瓜的產地加工法有普通加工法和蒸(煮)加工法[2]。有研究表明,生曬、燙曬兩種產地加工方法對木瓜的質量無顯著影響[3-4]。另有研究提出,新鮮木瓜直接加工成飲片可減少后續加工程序,更好地保留藥材中的有效成分[5-6]。但對產地加工法的研究還有待進行全面細致的考察和深入探討,考察指標和檢測方法也有待進一步優化。

齊墩果酸、熊果酸為木瓜中的主要有效成分。其中齊墩果酸具有消炎抑菌、降低轉氨酶、促進肝細胞再生、防止肝硬化、增強機體免疫功能等作用[7];熊果酸具有鎮靜、抗炎、抗菌、抗潰瘍、降血糖等多種生物學效應,還具有明顯的抗氧化功能[8-9]。為此,本研究通過測定宣木瓜藥材中齊墩果酸、熊果酸的含量,對宣木瓜的不同產地加工方法進行全面考察和深入探討。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜檢測儀(包括G1322A在線脫氣機,G1312B二元梯度泵,G1329B自動進樣器,G1316A柱溫箱,G4212B DAD檢測器,Agilent 1260色譜工作站),Agilent HC-C18(2)色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm,NO.588905-902),DV215CD十萬分之一電子分析天平(美國OHAUS),KQ5200DE臺式數控超聲波清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)。

齊墩果酸對照品(批號110709-200304)、熊果酸對照品(批號110742-200516)均購自中國食品藥品檢定研究院;甲醇為色譜純,天津百世化工有限公司;娃哈哈純凈水,其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 藥材采集

宣木瓜藥材(農家品種芝麻點[10])采自安徽省宣城市宣州區新田鎮道地產區,所有樣品均采自同一植株。經本校中藥生藥教研室汪榮斌副教授鑒定為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa (Sweet) Nakai的果實。

2.2 不同加工方法制備樣品

2.2.1 鮮藥材對半縱剖曬干品 鮮藥材凈選,對半縱剖,除去內果皮(含種子,下述內果皮均為含種子的內果皮),置藥匾中日曬夜露至干。編號為M1。

2.2.2 鮮藥材燙制后對半縱剖曬干品 鮮藥材凈選,在沸水中燙至外皮灰白色(較小者燙8 min,稍大者燙10 min),取出,對半縱剖,除去內果皮,置藥匾中日曬夜露至干。編號為M2。

2.2.3 鮮藥材蒸制后對半縱剖曬干品 鮮藥材凈選,置已“圓汽”籠屜上蒸至外皮灰白色(較小者蒸10 min,稍大者蒸12 min),取出,對半縱剖,除去內果皮,置藥匾中日曬夜露至干。編號為M3。

2.2.4 鮮藥材對半縱剖后燙制曬干品 鮮藥材凈選,對半縱剖,除去內果皮,投入沸水中燙至外皮灰白色(約5 min),取出,置藥匾中日曬夜露至干。編號為M4。

2.3 樣品曬干判斷標準

曬干的成品背面無青色,呈紫紅色或棕紅色,具有不規則的深皺褶及微細皺紋。連續晴朗天氣,氣溫為35~39 ℃,1周內曬制的藥材不再減失質量,判斷為藥材已曬干。折干率(%)=曬干后成品質量÷鮮藥材質量×100%。樣品折干率見表1。

2.4 內果皮的收集

分別收集不同加工法樣品的內果皮,曬干(曬干判斷標準同樣品),備用。內果皮比重(%)=曬干后的內果皮質量÷曬干后成品質量×100%。樣品內果皮比重見表1。

0.024 13.12 7.55

2.5 齊墩果酸、熊果酸含量測定

2.5.1 色譜條件 Agilent HC-C18(2)色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(89∶11∶0.1∶0.05);檢測波長:210 nm;柱溫:25 ℃;流速:1.0 mL/min;自動進樣,進樣量20 μL;理論塔板數在13 000以上[1]。

2.5.2 對照品溶液的制備 分別精密稱定齊墩果酸對照品0.004 03 g和熊果酸對照品0.004 01 g,置同一10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,制成含齊墩果酸403 μg/mL、熊果酸401 μg/mL的對照品混合溶液。

2.5.3 供試品溶液的制備 取樣品粗粉(過60目篩)約0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,密塞,搖勻,稱定質量,超聲處理(功率250 W,頻率40 Hz)20 min,取出,放冷,再稱定質量,用甲醇補足減失的質量,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過,取續濾液作為供試品溶液。

2.5.4 線性關系考察 取齊墩果酸、熊果酸混合對照品溶液,按“2.5.1”項下色譜條件,依次進樣0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL,測定對照品吸收峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標、峰面積為縱坐標進行線性回歸,得回歸方程:齊墩果酸Y=0.472 178X-2.346 71,r=0.999 99;熊果酸Y=0.431 128X-3.094 99,r=0.999 99。表明齊墩果酸在0.0806~4.836 μg、熊果酸在0.0802~4.812 μg范圍內進樣量與峰面積積分值成良好線性關系。色譜圖見圖1。

2.5.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液,連續進樣6次,結果齊墩果酸峰面積RSD=1.38%,熊果酸峰面積RSD=1.71%,表明精密度良好。

2.5.6 重復性試驗 取同一份樣品(M1)粉末6份,按“2.5.3”項下方法制備,進樣測定,結果齊墩果酸峰面積RSD=2.52%,熊果酸峰面積RSD=2.00%,表明重復性良好。

2.5.7 穩定性試驗 取同一份供試品溶液(M1),在0、4、12、24、36、48 h進樣測定,結果齊墩果酸峰面積RSD=1.56%,熊果酸峰面積RSD=1.98%,表明供試品溶液在48 h內穩定。

2.5.8 加樣回收率試驗 取已知含量的宣木瓜樣品(M1)粉末5份,每份約0.50 g,分別按1∶1質量水平加入齊墩果酸、熊果酸對照品,按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液并進行測定,計算加樣回收率。齊墩果酸加樣回收率為99.86%,RSD=1.97%;熊果酸加樣回收率為100.00%,RSD=2.87%。結果見表2。

2.5.9 樣品含量測定 分別取不同樣品,按“2.5.3”項下方法制備并進行測定。樣品以干燥品計,含水量為曬干后樣品的水分含量,按2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄Ⅸ H水分測定第一法測定,結果見表3。

3 討論

本研究以齊墩果酸和熊果酸的含量為考察指標,對宣木瓜的不同產地加工方法進行了考察,結果顯示,4種不同加工方法制備的樣品中齊墩果酸和熊果酸的總含量分別為0.86%、0.93%、1.29%、1.47%,鮮藥材直接對半縱剖曬干品含量最低,經燙、蒸等處理后對半縱剖曬干品含量明顯提高,并以鮮藥材先對半縱剖后燙制曬干品中齊墩果酸和熊果酸的總含量為最高。

在同樣的干燥條件下,不同加工法樣品的折干率比較接近,約為12%~13%;樣品的含水量在安全范圍(7%~13%)內,表明以傳統方法判斷樣品是否曬干是可行的。曬制時,開始2~3 d要把切面對著陽光,無水分外滲后可任意翻曬。采取日曬夜露,曬干的成品背面無青色,呈紫紅色或棕紅色,具有不規則的深皺褶及微細皺紋。

本試驗結果表明,產地不同加工法對宣木瓜藥材中齊墩果酸、熊果酸的含量有顯著影響,藥材經燙、蒸等濕熱處理,可以提高齊墩果酸和熊果酸的總含量,與濕熱接觸越充分則齊墩果酸和熊果酸的含量越高,進一步驗證了齊墩果酸和熊果酸對熱的穩定性,表明了傳統的產地加工方法的科學性。結合文獻[11-12],筆者認為在產地加工過程中濕熱處理促進了木瓜有效成分齊墩果酸、熊果酸含量的提高,從而保證并提高了宣木瓜藥材的質量。

本研究進一步對宣木瓜產地不同加工品的內果皮(俗稱核)進行了含量測定,齊墩果酸和熊果酸的總含量分別為0.11%、0.14%、0.07%、0.08%,發現其內果皮的齊墩果酸和熊果酸含量明顯較低,與各樣品整體的齊墩果酸和熊果酸含量不成規律一致性變化,且質量占整個木瓜藥材(曬干后的成品)比重較小,僅為7%~8%,因此可忽略內果皮對整個藥材質量的影響。

參考文獻:

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:57.

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[6] 周明星,鄧改改,丁明若,等.鮮切皺皮木瓜飲片中齊墩果酸和熊果酸含量測定[J].三峽大學學報:自然科學版,2011,33(4):85-88.

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[10] 黃立厚,王尚全,朱永芳.宣木瓜品種性狀的調查[J].中藥材,1986, 9(6):1-5.

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[12] 喻喜華,陳曉輝,戴榮華,等.UPLC測定山茱萸生品與酒炙品中齊墩果酸與熊果酸的含量[J].中國現代中藥,2010,12(5):26-28.

2.5.3 供試品溶液的制備 取樣品粗粉(過60目篩)約0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,密塞,搖勻,稱定質量,超聲處理(功率250 W,頻率40 Hz)20 min,取出,放冷,再稱定質量,用甲醇補足減失的質量,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過,取續濾液作為供試品溶液。

2.5.4 線性關系考察 取齊墩果酸、熊果酸混合對照品溶液,按“2.5.1”項下色譜條件,依次進樣0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL,測定對照品吸收峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標、峰面積為縱坐標進行線性回歸,得回歸方程:齊墩果酸Y=0.472 178X-2.346 71,r=0.999 99;熊果酸Y=0.431 128X-3.094 99,r=0.999 99。表明齊墩果酸在0.0806~4.836 μg、熊果酸在0.0802~4.812 μg范圍內進樣量與峰面積積分值成良好線性關系。色譜圖見圖1。

2.5.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液,連續進樣6次,結果齊墩果酸峰面積RSD=1.38%,熊果酸峰面積RSD=1.71%,表明精密度良好。

2.5.6 重復性試驗 取同一份樣品(M1)粉末6份,按“2.5.3”項下方法制備,進樣測定,結果齊墩果酸峰面積RSD=2.52%,熊果酸峰面積RSD=2.00%,表明重復性良好。

2.5.7 穩定性試驗 取同一份供試品溶液(M1),在0、4、12、24、36、48 h進樣測定,結果齊墩果酸峰面積RSD=1.56%,熊果酸峰面積RSD=1.98%,表明供試品溶液在48 h內穩定。

2.5.8 加樣回收率試驗 取已知含量的宣木瓜樣品(M1)粉末5份,每份約0.50 g,分別按1∶1質量水平加入齊墩果酸、熊果酸對照品,按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液并進行測定,計算加樣回收率。齊墩果酸加樣回收率為99.86%,RSD=1.97%;熊果酸加樣回收率為100.00%,RSD=2.87%。結果見表2。

2.5.9 樣品含量測定 分別取不同樣品,按“2.5.3”項下方法制備并進行測定。樣品以干燥品計,含水量為曬干后樣品的水分含量,按2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄Ⅸ H水分測定第一法測定,結果見表3。

3 討論

本研究以齊墩果酸和熊果酸的含量為考察指標,對宣木瓜的不同產地加工方法進行了考察,結果顯示,4種不同加工方法制備的樣品中齊墩果酸和熊果酸的總含量分別為0.86%、0.93%、1.29%、1.47%,鮮藥材直接對半縱剖曬干品含量最低,經燙、蒸等處理后對半縱剖曬干品含量明顯提高,并以鮮藥材先對半縱剖后燙制曬干品中齊墩果酸和熊果酸的總含量為最高。

在同樣的干燥條件下,不同加工法樣品的折干率比較接近,約為12%~13%;樣品的含水量在安全范圍(7%~13%)內,表明以傳統方法判斷樣品是否曬干是可行的。曬制時,開始2~3 d要把切面對著陽光,無水分外滲后可任意翻曬。采取日曬夜露,曬干的成品背面無青色,呈紫紅色或棕紅色,具有不規則的深皺褶及微細皺紋。

本試驗結果表明,產地不同加工法對宣木瓜藥材中齊墩果酸、熊果酸的含量有顯著影響,藥材經燙、蒸等濕熱處理,可以提高齊墩果酸和熊果酸的總含量,與濕熱接觸越充分則齊墩果酸和熊果酸的含量越高,進一步驗證了齊墩果酸和熊果酸對熱的穩定性,表明了傳統的產地加工方法的科學性。結合文獻[11-12],筆者認為在產地加工過程中濕熱處理促進了木瓜有效成分齊墩果酸、熊果酸含量的提高,從而保證并提高了宣木瓜藥材的質量。

本研究進一步對宣木瓜產地不同加工品的內果皮(俗稱核)進行了含量測定,齊墩果酸和熊果酸的總含量分別為0.11%、0.14%、0.07%、0.08%,發現其內果皮的齊墩果酸和熊果酸含量明顯較低,與各樣品整體的齊墩果酸和熊果酸含量不成規律一致性變化,且質量占整個木瓜藥材(曬干后的成品)比重較小,僅為7%~8%,因此可忽略內果皮對整個藥材質量的影響。

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[12] 喻喜華,陳曉輝,戴榮華,等.UPLC測定山茱萸生品與酒炙品中齊墩果酸與熊果酸的含量[J].中國現代中藥,2010,12(5):26-28.

2.5.3 供試品溶液的制備 取樣品粗粉(過60目篩)約0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,密塞,搖勻,稱定質量,超聲處理(功率250 W,頻率40 Hz)20 min,取出,放冷,再稱定質量,用甲醇補足減失的質量,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過,取續濾液作為供試品溶液。

2.5.4 線性關系考察 取齊墩果酸、熊果酸混合對照品溶液,按“2.5.1”項下色譜條件,依次進樣0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL,測定對照品吸收峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標、峰面積為縱坐標進行線性回歸,得回歸方程:齊墩果酸Y=0.472 178X-2.346 71,r=0.999 99;熊果酸Y=0.431 128X-3.094 99,r=0.999 99。表明齊墩果酸在0.0806~4.836 μg、熊果酸在0.0802~4.812 μg范圍內進樣量與峰面積積分值成良好線性關系。色譜圖見圖1。

2.5.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液,連續進樣6次,結果齊墩果酸峰面積RSD=1.38%,熊果酸峰面積RSD=1.71%,表明精密度良好。

2.5.6 重復性試驗 取同一份樣品(M1)粉末6份,按“2.5.3”項下方法制備,進樣測定,結果齊墩果酸峰面積RSD=2.52%,熊果酸峰面積RSD=2.00%,表明重復性良好。

2.5.7 穩定性試驗 取同一份供試品溶液(M1),在0、4、12、24、36、48 h進樣測定,結果齊墩果酸峰面積RSD=1.56%,熊果酸峰面積RSD=1.98%,表明供試品溶液在48 h內穩定。

2.5.8 加樣回收率試驗 取已知含量的宣木瓜樣品(M1)粉末5份,每份約0.50 g,分別按1∶1質量水平加入齊墩果酸、熊果酸對照品,按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液并進行測定,計算加樣回收率。齊墩果酸加樣回收率為99.86%,RSD=1.97%;熊果酸加樣回收率為100.00%,RSD=2.87%。結果見表2。

2.5.9 樣品含量測定 分別取不同樣品,按“2.5.3”項下方法制備并進行測定。樣品以干燥品計,含水量為曬干后樣品的水分含量,按2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄Ⅸ H水分測定第一法測定,結果見表3。

3 討論

本研究以齊墩果酸和熊果酸的含量為考察指標,對宣木瓜的不同產地加工方法進行了考察,結果顯示,4種不同加工方法制備的樣品中齊墩果酸和熊果酸的總含量分別為0.86%、0.93%、1.29%、1.47%,鮮藥材直接對半縱剖曬干品含量最低,經燙、蒸等處理后對半縱剖曬干品含量明顯提高,并以鮮藥材先對半縱剖后燙制曬干品中齊墩果酸和熊果酸的總含量為最高。

在同樣的干燥條件下,不同加工法樣品的折干率比較接近,約為12%~13%;樣品的含水量在安全范圍(7%~13%)內,表明以傳統方法判斷樣品是否曬干是可行的。曬制時,開始2~3 d要把切面對著陽光,無水分外滲后可任意翻曬。采取日曬夜露,曬干的成品背面無青色,呈紫紅色或棕紅色,具有不規則的深皺褶及微細皺紋。

本試驗結果表明,產地不同加工法對宣木瓜藥材中齊墩果酸、熊果酸的含量有顯著影響,藥材經燙、蒸等濕熱處理,可以提高齊墩果酸和熊果酸的總含量,與濕熱接觸越充分則齊墩果酸和熊果酸的含量越高,進一步驗證了齊墩果酸和熊果酸對熱的穩定性,表明了傳統的產地加工方法的科學性。結合文獻[11-12],筆者認為在產地加工過程中濕熱處理促進了木瓜有效成分齊墩果酸、熊果酸含量的提高,從而保證并提高了宣木瓜藥材的質量。

本研究進一步對宣木瓜產地不同加工品的內果皮(俗稱核)進行了含量測定,齊墩果酸和熊果酸的總含量分別為0.11%、0.14%、0.07%、0.08%,發現其內果皮的齊墩果酸和熊果酸含量明顯較低,與各樣品整體的齊墩果酸和熊果酸含量不成規律一致性變化,且質量占整個木瓜藥材(曬干后的成品)比重較小,僅為7%~8%,因此可忽略內果皮對整個藥材質量的影響。

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木瓜 含量 藥材
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